Hemoglobina y derivados

La hemoglobina (Hb) es una proteína conjugada formada por una globina y un grupo prostético denominado hemo. Es un pigmento rojo que contiene hierro al estado ferroso y al que le corresponde la función fisiológica del transporte de oxígeno y del anhídrido carbónico. Alrededor del 55% de la célula roja está constituido por Hb que tiene un peso molecular de 64.458 con 0.347% de hierro y que es capaz de ligar una molécula de oxígeno gaseoso por equivalente. 

Cuando la HB se expone a la acción de varios gases o agentes tóxicos sobrevienen cambios en su constitución que resultarán reversibles o irreversibles. Tanto la Hb como estos compuestos pueden identificarse en forma espectroscópica de acuerdo con el número y la posicón de sus bandas de absorción.

Se emplean a tal efecto distintos modelos de espectroscopios en lo que se hace la comparación de la sangre recogida sobre ozalato seco y diluida 1/50 con agua destilada, con diferentes testigos que contienen los derivados de Hb que interesa investigar.

METAHEMOGLOBINA

Es un pigmento marrón que resulta de la oxidación de los 4 átomos de hierro de la molécula hemoglobínica, que pasan del estado bivalente o ferroso al trivalente o férrico. Una pequeña cantidad de Hb en presencia de oxígeno es por lo normal oxidada con mucha lentitud, pero es reducida con facilidad por el NADH o NADPH, que dependen del sistema reductasa de la metahemoglobina.

Pueden ocurrir aberraciones en este sistema intraeritrocitario que conducen a la metahemoglobinemia. Ésta puede adquirirse o ser hereditaria y congénita. La primera es el resultado de la acción de agentes oxidantes como los nitritos, derivados de la anilina, sulfonamidas, fenacetina...

TIPOS DE HEMOGLOBINA

Pauling y col. pudieron separar por electroforesis en 1949 una Hb anormal en la anemia drepanocítica; esta Hb fue denominada Hb S. Los individuos normales son homocigóticos para la Hb adulta normal (AA), los pacientes con anemia drepanocítica son también homocigóticos (SS). Los portadores de la enfermedad talasémica son heterocigóticos (AS). La enfermedad se hereda con caracteres mendelianos simples; el par de alelos determina la aparicón de una u otra Hb, careciendo los dos de carácter dominante...

La hemoglobina normal del hombre o Hb A constituye la mayor proporción (95-98 %) de la Hb adulta; está formada por 4 cadenas de polipéptidos de las cuales cada dos son iguales etnre sí; se denominan cadenas alfa y cadenas beta. La primera consta de 141 aminoácidos contiene bastantes más frupos ácidos que la cadena beta, formada por 146 aminoácidos; ambos se encuentran unidos entre sí por relaciones iónicas y puentes de hidrógeno.

Existe también la Hb A2 que comprende del 1 al 3% de la Hb total adulta y que alcanza el nivel adulto al finalizar el primer año de vida. Tiene dos cadenas alfa y dos cadenas delta. En la electroforesis en papel a pH alcalino tiene una menor velocidad de migración que la HbA.

También hay una HbA3 que comprende del 5 al 15% de la Hb total adulta; en electroforesis en papel a ph alcalino, migra algo más fápido que la HbA. Está caracterizada por un complejo extra de glutatión en la cadena beta y quizá sea el resultado del envejecimiento.

Existe tabién en el hombre, en pequeñas cantidades, una Hb F (fetal) que contiene 2 cadenas alfa y 2 cadenas gamma. En los recién nacidoshay un 60-80% de esta Hb la mayoria de la cual desaparece durante los primeros cinco meses de vida, y queda un resto de 3-15%; al año 2,9 %; a los 2 años 1.8%; a los 3 años 1%; y a los 4 años 0.8%.

FUENTE: IÓVINE Enrique; SELVA Alejandro: El laboratorio en la clínica. Tercera edición. Buenos Aires: Panamericana, 1985. 

Imágenes obtenidas de      http://fondosdibujosanimados.com.es/wallpaper/Hemoglobina/

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Observación de bacterias y sangre humana en el microscopio

En el siguiente video, obtenido por BioQ (todos los derechos reservados) se pueden visualizar algunos de los trabajos realizados con microscopía óptica en el laboratorio. Se observan bacterias, leucocitos, eritrocitos y tejido vegetal.

GRUPOS SANGUÍNEOS

Cuando se mezclan suero y glóbulos de distintas personas puede ocurrir que tales mezclas permanezcan homogéneas o bien que aparezca aglutinación. Esto permitió asentar el concepto de compatibilidad sanguínea, tan importante en la práctica de las transfusiones.
La aglutinación se produce por la actuación de los anticuerpos del suero o aglutininas sobre los antígenos del estroma de los hematíes o aglutinógenos. De acuerdo la existencia de los diversos aglutinógenos y aglutininas los individuos pueden clasificarse dentro de cuatro grupo sanguíneo básicos.
La clasificación admitida en la actualidad, de acuerdo a la recomendación del comité de higiene de la Sociedad de las Naciones establece la existencia de cuatro tipos:
Grupo 0: este grupo no tiene aglutinógenos pero si dos aglutininas, alfa y beta.
Grupo A: este grupo tiene aglutinógenos a y aglutininas beta.
Grupo B: este grupo tiene aglutinógenos b y aglutininas alfa.
Grupo AB: este grupo tiene ambos aglutinógenos y ninguna aglutininas. Por eso también se simboliza ABO.
De acuerdo con esta clasificación se deduce que el grupo sanguíneo está determinado por la presencia o ausencia de aglutinógenos y aglutininas.
Es interesante ese mismo señalar que el grupo sanguíneo es una característica de todas las células y humores del organismo.
Los individuos del grupo 0 se denominan valores universales; teóricamente estos individuos pueden dar sangre a cualquier sujeto aun sin conocer su grupo. Los del grupo AB son los denominados receptores universales, es decir, los que teóricamente puedan recibir sangre de cualquier sujeto aun sin conocer su grupo.
El grupo sanguíneo es una característica permanente e inmutable; su herencia se produce como carácter dominante simple mendeliano.
Aun cuando sea considerado al grupo 0 como orador universal existen, no obstante, limitaciones que pueden convertirlo en peligroso en la práctica a la transfusión. Esto sucede porque este grupo puede tener altos títulos de aglutininas alfa y beta, es decir, capaces de actuar sobre los aglutinógenos A y B y producir aglutinación de los hematíes homólogos de los receptores, se trate del grupo A, B o AB.
En la práctica, esta peligrosidad es marcada en caso de transfusiones rápidas, de volúmenes transfundidos grandes o de anemias relativas en los receptores.

En el siguiente video, se expicita una de las técnicas para la determinación de grupo sanguíneo, mediante el uso de sueros tipificadores.





La siguiente imágen, obtenida de http://jorgercbiopuntalarga.blogspot.com/ muestra la técnica más común. En portaobjetos y con sueros tipificadores.

 Imágen Obtenida de: http://jorgercbiopuntalarga.blogspot.com/

FUENTE: IÓVINE Enrique; SELVA Alejandro: El laboratorio en la clínica. Tercera edición. Buenos Aires: Panamericana, 1985.

Anticoagulantes

Son sustancias que de una u otra manera interrumpen o impiden el ciclo de hemostasia.

En hematología el uso de estos agentes es muy importante ya que nos permiten realizar  diversos análisis en los cuales es necesario trabajar con muestras no coaguladas.

Hay dos clases de anticoagulantes, los de uso endógeno y exógenos: en este artículo nos referiremos a los exógenos.

Dentro de estos, se encuentran diversos modelos de anticoagulantes y cada uno de ellos con función y mecanismo de acción característico:

EDTA (ácido etilendiaminotetracético):

Sal disódica o tripotásica del ácido etilendaimintetracético, siendo esta ultima más soluble.

Este anticoagulante actúa como agente quelante del Calcio, lo que impide su activación y no deja producir la coagulación sanguínea, dado que al PH que se lo trabaja, el EDTA tiene una acción complejante muy potente.

Es uno de los anticoagulantes exógenos por excelencia, ya que cumple con varios parámetros para ser un buen anticoagulante -no alterar la morfología eritrocitaria ni leucocitaria, inhibe la aglutinación de plaquetas, asegura la conservación de elementos formes durante 24 horas si las muestras son conservadas a 4°C-.

* Es utilizado en una concentración de 0.342 mol/L a un PH= 7.20

* Una gota de EDTA (50 µL) impide la coagulación de hasta 6 ml de sangre, puede ser empleado directamente en fase liquida o bien colocando un gota en un tubo y secado en estufa a 37°C-50°C.

Citrato de Sodio:

Compuesto por sal trisódica, es el anticoagulante por excelencia para pruebas de hemostasia y velocidad de sedimentación globular.

Este actúa de manera tal que no permite que el calcio se ionice, haciendo que el mismo no intervenga en la coagulación.

* Es utilizado al 3,8%  (3,8g de citrato de sodio en 100mL de agua destilada), y PH= 7.20

* Hemostasia: es usado en proporción 1/9 (1 volumen de anticoagulante para 9 volúmenes de sangre).

* Eritrosedimentación (VSG): En proporción 1/4 (1 volumen de anticoagulante para 4 volúmenes de sangre).

Heparina:

Puede darse sódica o de litio.

Esta tiene la acción de evitar la formación de trombina a partir de protrombina, interrumpiendo así el ciclo hemostático.

* Se utiliza a razón de 0.1 - 0.2mg por 1mL de sangre; debe de ser agitado rápidamente con la sangre dado a que pueden llegar a formarse microcoágulos.

Anticoagulante según Wintrobe:

Se da por una mezcla de sales, oxalato de amonio y oxalato de potasio.

Actúa por precipitación del calcio.

No afecta el volumen globular medio y puede utilizarse para determinaciones de hemoglobina, hematocrito, recuento globular, eritrosedimentación según wintrobe.

*Preparación:

  Oxalato de Amonio............................... 1.2g
  Oxalato de Potasio................................ 0.8g
  Agua destilada.......................................100mL

*Para utilización se colocan 0.5mL de esta mezcla en tubos pequeños o frasquitos y se deja evaporar en estufa a 37°C. Evitar temperaturas más elevadas por la descomposición del oxalato de amonio. Esta cantidad de anticoagulante sirve para recoger 5mL de sangre. Agitar con suavidad por rotación. Evitar la agitación violenta que destruye las células.

FUENTE: Henry, R., Clinical Chemistry. Principles and Technics (1964), IÓVINE Enrique; SELVA Alejandro: El laboratorio en la clínica. Tercera edición. Buenos Aires: Panamericana, 1985.

                     Imagen Obtenida por Laboratorio BioQ. Todos los derechos reservados.

HEMATOLOGÍA

Recolección de Muestras


La obtención de muestras de sangre para efectuar el estudio hematológico se hace en general por punción venosa de los pacientes en condiciones basales y en ayunas.
A tal efecto se evitará la compresi´n demasiado enérgica del brazo y la sangre recogida con jeringa seca se pasará a tubos o frascos que contengan anticoagulante.
Los frotis para el estudio de la fórmula leucocitaria pueden hacerse con sangre de punción capilar o con una pequeña gota de sangre venosa obtenida con jeringa. No debe untilizarse nunca la sangre que estuvo en contacto con el anticoagulante porque éste altera la morfología celular.

Anticoagulantes:
El más utilizado es la mezcla de Wintrobe:
- Oxalato de Amonio............................... 1.2g
- Oxalato de Potasio................................ 0.8g
- Agua destilada....................................... 100,00 mL

Se colocan 0.5 mL de esta mezca en tubos pequeños o frasquitos y se deja evaporar en estufa a 37°C. Evitar temperaturas más elevadas por la descomposición del oxalto de amonio. Esta cantidad de anticoagulatne sirve para recoger 5,00 mL de sangre. Agitar con suavidad por rotación. Evitar la agitación violenta que destruye las células.

FUENTE: IÓVINE Enrique; SELVA Alejandro: El laboratorio en la clínica. Tercera edición. Buenos Aires: Panamericana, 1985.

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